ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中產(chǎn)品水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成后的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，通過標準曲線計算樣品中產(chǎn)品濃度。
適用領(lǐng)域：
1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
國產(chǎn)ELISA試劑盒的性能：
1、靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2、特異性：不與其它細胞因子反應。
3、重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
ELISA試劑盒的標本處理：
1、本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本；
2、實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)；
3、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣本；
4、使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差；
5、若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況；
6、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出；
7、建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。
