l Gibco胎牛血清使用方法

        在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，較常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結果，我們在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

l Gibco胎牛血清保存方法

1、需要長期保存的Gibco牛血清，例如Gibco南美胎牛血清，必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)Gibco牛血清有懸浮物,例如Gibco北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

3、瓶裝Gibco胎牛血清南美解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。

5、血清中的沉淀物和絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。

GibcoUSDA胎牛血清

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